PRÁCTICA 19: MÉTODO DEL EPSILON TEST(E-TEST).

OBJETIVOS:

Determinación de la CMI (concentración mínima inhibitoria)que se define como la menor concentración de antimicrobiano que es capaz de inhibir el desarrollo de una cepa bacteriana dada.


MATERIALES:

- Medio de cultivo Müeller-Hinton.
- Klebsiella..
- Mechero Bunsen.
- SSF esteril.
- Asa de siembra.
- Pinzas de metal.
- Hisopo estéril.
- Tiras de E-test.

PROCEDIMIENTO:

En primer lugar preparar el inóculo con tres o cuatro colonias bacterianas del cultivo de klebsiella en 5 mL de SSF estéril.
Seguidamente inocular la superficie del medio de cultivo Müeller-Hinton con el hisopo pasandolo uniformemente por la superficie en tres direcciones y por el reborde de la placa. Dejar secar 5'.
Por último con unas pinzas estériles depositar una tira de E-test que contienen, en su superficie inferior, un gradiente de concentración de antimicrobiano (equivalente a 15 diluciones) sobre la superficie apretándola suavemente.
Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 24h.

RESULTADOS:

Cuando el antibiótico difunde en el medio, establece un gradiente contínuo de antimicrobiano a lo largo de la tira y después de laincubación se forma una zona elíptica de inhibición del crecimiento.
La CMI se corresponde con el punto donde el borde del área de inhibición del crecimientp intersecciona con la tira.

CMI= 16 µg/mL.

FOTOGRAFÍAS:

PRÁCTICA 18: KIRBY-BAUER/MÉTODO DE DIFUSIÓN POR DISCO.

OBJETIVOS:

Determinación grado de sensibilidad del microorganismo(Proteus) a determinados antibióticos.

MATERIALES:

- Medio de cultivo Müeller-Hinton.
- Proteus.
- Mechero Bunsen.
- SSF esteril.
- Asa de siembra.
- Pinzas de metal.
- Hisopo estéril.
- Antibióticos: Amoxicilina (AMC), Tobramicina (NN), Cefotaxima (CTX) y Ampicilina (AM).

PROCEDIMIENTO:

En primer lugar preparar el inóculo con tres o cuatro colonias bacterianas del cultivo de proteus en 5 mL de SSF estéril.
Seguidamente inocular la superficie del medio de cultivo Müeller-Hinton con el hisopo pasandolo uniformemente por la superficie en tres direcciones y por el reborde de la placa. Dejar secar 5'.
Por último con unas pinzas estériles depositar un disco de cada uno de los antibióticos citados anteriormente sobre la superficie apretándolos suavemente.
Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 24h.

RESULTADOS:

Con ayuda de una regla milimetrada medir el diámetro del halo de inhibición de cada antibiótico y llevar el resultado de la medición a una tabla para establecer el grado de sensibilidad de proteus a dichos antibióticos.

  

DIÁMETRO(mm) HALOS DE INHIBICIÓN:
- Amoxicilina (AMC) -> 1,5 cm(radio) X 2 = 3,0 cm -> 30 mm.
- Tobramicina (NN) -> 1 cm(radio) X 2 = 2 cm -> 20 mm.
- Cefatoxima (CTX) -> 1,8 cm(radio) X 2 = 3,6 cm -> 36 mm.
- Ampicilina (AM) -> 1,7 cm -> 17 mm.

-Amoxicilina (AMC) -> S (sensible).
- Tobramicina (NN) ->S (sensible).
- Cefatoxima (CTX) -> S (sensible).
- Ampicilina (AM) -> S (sensible).

FOTOGRAFÍAS: