- OBJETIVOS:
Determinar cuantitativamente los anticuerpos séricos dirigidos contra Toxoplasma gondii por hemoaglutinación indirecta.
- FUNDAMENTOS:
Se basa en el principio de hemoaglutinación indirecta. Esta técnica permite detectar ás IgG y las IgM anti-toxoplasmáticas. Es posible diferenciarlas tratando el suero con 2-mercaptoetanol el cual inhibe el poder aglutinante de las IgM.
La presencia de Ac anti-Toxoplasma Gondii séricos provoca una aglutinación de los hematíes sensibilizados que se traduce en un velo rojo/marrón que tapiza el pocillo. En ausencia de anticuerpos específicos, estos hematíes se sedimentan en el fondo del pocillo con un anillo.
Los hematíes no sensibilizados aseguran la especificidad de la reacción y permiten eliminar las interferencias debidas a las aglutininas naturales anti-ovino (heteroanticuerpos ).
- MATERIAL:
- Micropipeta 50µl.
- Puntas de pipeta.
- Microplaca de fondo U.
- Tubo de ensayo.
- REACTIVOS:
- Hematíes sensibilizados (Tapón rojo).
- Hematíes no sensibilizados (Tapón verde).
- Control positivo.
- Control negativo.
- Tampón fosfato pH 7,2.
- MUESTRA:
- Suero.
- PROCEDIMIENTO:
- Preparar una dilución madre de suero a analizar.
Distribuir en un tubo:
50µl de suero.
1950µl de tampón fosfato.
- Preparar batería de dilución, suero control, reactivo control, C+ y C- con las siguientes cantidades:
- RESULTADOS:
Cuando se ealiza la titulación del suero del paciente por aglutinación en ausencia de 2-ME y se informa un título, en realidad se está informando una actividad aglutinante que e sla suma de la actividad aglutinante de la IgM y de la IgG.
TÍTULO -> 1:80
Si siguiendo el protocolo provisto por el fabricante, se realiza la técnica en presencia de 2-ME se produce una reducción de la IgM. El título que se obtiene al realizar la técnica de aglutinación en presencia de 2-ME corresponderá exclusivammente a la actividad aglutinante de la IgG.
- Si disminuye el títilo al menos 2 diluciones -> mido Ig M
- Si disminuye -> mido Ig G
FOTOGRAFÍAS:
