PRÁCTICA 14: API

OBJETIVOS Y FUNDAMENTOS:

Sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluyen 21 test bioquímicos miniaturizados. Los microtúbulos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los test. Las reacciones producidas durante el período de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos.

MATERIALES:

- Pipeta  Pasteur.
- SSF 5 mL.
- Asa de siembra.
- Galerías 20E.
- Cámara de incubación.
- Parafina líquida.

REACTIVOS:

- Cloruro férrico al 10% -> TDA/APP/FENILALANINA DESAMINASA.
- VP 1 -> alfa-naftol
- VP 2 ->  KOH al 40% ->  VOGES-PROSKAUER.
- Reactivo de James -> INDOL.
- NIT 1 -> alfa-naftil-amina
- NIT 2 -> ácido sulfanílico
- Zn -> CALDO NITRATO.

PROCEDIMIENTO:

- Preparar inóculo de la bacteria a estudiar directamente en el bote de solución salina 5mL.
- Llenar todos los tubos de la galería.
- Rellenar las cúpulas del CIT, VP y GEL.
- Añadir parafina al tubo de ADH, LDC, ODC, H2S, URE.
- Tapar la galería con la cámara de incubación.
- Incubar 24h a 37ºC.

 REVELADO, LECTURA E IDENTIFICACIÓN:

 Si el número de pruebas positivas antes de añadir los reactivos(incluyendo el ensayo GLU) es inferior a 3: REINCUBAR LA GALERÍA 24 H SUPLEMETARIAS.

-1 gota de Cloruro férrico al 10% -> TDA/APP/FENILALANINA DESAMINASA.
- 1 gota de VP 1 -> alfa-naftol
- 1 gota de VP 2 ->  KOH al 40% ->  VOGES-PROSKAUER.
- 1 gota de Reactivo de James -> INDOL.
- 1 gota de NIT 1 -> alfa-naftil-amina
- 1 gota de NIT 2 -> ácido sulfanílico
- 1 cucharadita de Zn -> CALDO NITRATO.
La lectura de la galería debe hacerse remitiéndose a la tabla de lectura.
La identificación se obtiene a partir del perfil numérico de siete cifras (los test están separados en grupos de tres y se indica para cada uno un valor de 1, 2 ó 4). localizar dicho perfil en la lista de perfiles numéricos.

RESULTADO:

FOTOGRAFÍAS: