PRÁCTICA 11:PRUEBAS IDENTIFICACIÓN COCOS GRAM POSITIVOS.

Microorganismo práctica -> Micrococcus Luteus

CATALASA

OBJETIVO Y FUNDAMENTO:

La catalasa es una enzima, propia de las bacterias aerobias/anaerobias facultativas, que descompone el H2O2 en agua y oxígeno. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.

MATERIALES:

- Asa de siembra.
- Portaobjetos.
- H2O2 al 3%
- Mechero de alcohol.
- Pipeta Pasteur.

PROCEDIMIENTO:

-Depositar sobre un portaobjetos una colonia, añadir una gota de H2O2 al 3% sin mezclar con el asa.

RESULTADOS:

Desprendimiento de burbujas -> prueba positiva.
Catalasa +

FOTOGRAFÍAS:

O/F

OBJETIVO Y FUNDAMENTO:

Capacidad que tienen los microorganismos de oxidar y/o fermentar la glucosa produciendo ácido, que se detecta gracias a la presencia de un indicador de pH que vira de color verde a amarillo.

MATERIALES:

- Hilo de siembra.
- Mechero de alcohol.
- Dos tubos con medio Hugh Leifson.
- Parafina líquida.

PROCEDIMIENTO:

- Sembrar la muestra, en picadura, en los dos tubos adicionado de un 1% de glucosa.
- Añadir a uno de los tubos parafina líquida para conseguir condiciones anaerobias(tubo F).
- Incubar 24-48h. a 37ºC.

RESULTADOS:

O/F -> -/- 

OBSERVACIONES:

No se ha producido viraje probablemente en el tubo F por contaminación del medio.


FOTOGRAFÍAS:

FERMENTACIÓN DEL MANITOL

OBJETIVOS Y FUNDAMENTOS:

Capacidad de los microorganismos para fermentar el manitol y crecer en presencia de una elevada concentración de NaCl.

MATERIALES:

- Asa de siembra.
- Mechero de alcohol.
- Medio de Chapman.

PROCEDIMIENTO:

- Realizar una siembra del microorganismo por agotamiento de estrías.

RESULTADOS: 

Cuando el microorganismo fermenta el manitol se producen metabolitos ácidos que cambian el pH del medio y el indicador vira a amarillo.

Manitol - 

DNAsa

OBJETIVOS Y FUNDAMENTOS:

Capacidad que tienen algunas bacterias para producir el enzima DNAsa, que produce la degradación del ADN que contiene el medio de cultivo.

MATERIALES:

- Asa de siembra.
- Mechero de alcohol.
- Ácido HCl(revelador).
- Placa Agar DNAsa.

PROCEDIMIENTO:

- Sembrar la muestra haciendo una estría de unos 2 cms en una placa con Agar DNAsa.
- Incubar 24h a 37ºC.
- Realizar la lectura añadiendo HCl 1N(precipita el ADN), y observar la aparición de zonas claras o  alrededor de la zona sembrada(prueba positiva).

RESULTADOS:

DNAsa -> -

   

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NOVOBIOCINA

OBJETIVOS Y FUNDAMENTOS:

Se basa en la resistencia que presentan algunas especies del género Staphylococcus a la novobiocina.

MATERIALES.

- Asa de siembra.
- Mechero de alcohol.
- Pinzas metálicas.
- Discos de novobiocina.

PROCEDIMIENTO:

- Sembrar haciendo estrías sobre un cuadrante en varias direcciones.
- Colocar , con pinzas estériles, un disco de novobiocina en el centro de la zona sembrada.
- Incubar la placa invertida 24h a 37ºC.

RESULTADOS:

-Sensible -> aparecen halos de inhibición alrededor del disco de novobiocina.
-Resistente -> hay crecimiento alrdedor del disco.

 

 FOTOGRAFÍAS: