PRÁCTICA 10: TINCIÓN DE GRAM Y DE BURRY.
 TINCIÓN DE GRAM:

OBJETIVOS Y FUNDAMENTO:

Diferencia entre bacterias Gram (+) que tienen pared celular gruesa y escasa en lípidos y bacterias Gram (-) que presentan pared celular fina y rica en lípidos y membrana externa.

MATERIALES:

-Asa de siembra desechable.
- Mechero de alcohol.
- Portaobjetos.
- Pinzas de madera.
- Agua destilada.
- SSF.
- Gradillas.
- Cubeta de tinción.
- Colorantes de Gram (Cristal violeta, Lugol, alcohol acetona, safranina).

 PROCEDIMIENTO:

1.EXTENSIÓN ->  en primer lugar ponemos una gota de SSF en el porta, cogemos colonia de la placa Petri y frotamos en el porta.
2. DESECACIÓN -> con ayuda del mechero de alcohol secamos muy bien la preparación del portaobbjetos.
3. FIJACIÓN -> flameamos varias veces el portaobjetos.
4. TINCIÓN -> 1' de cristal violeta y lavamos con agua destilada, 1' lugol y lavamos con agua destilada, 10'' alcohol acetona (inclinación del porta) y lavamos con agua destilada, finalmente añadimos la safranina  1' y lavamos con agua destilada.

RESULTADO:


- Ecoli -> cocos Gram (+)
- Enterococus ->  bacilos Gram (-)

TINCIÓN DE BURRI:

OBJETIVO Y FUNDAMENTO:

Diferenciación de cápsulas que son acumulación de material mucoso que rodean la pared celular de algunas bacterias.
Las cápsulas tienen un índice de refracción muy bajo por lo que se observan muy mal al microscopio óptico  y además son muy difíciles de teñir, por ello para visualizarla se utilizan colorantes que tiñen el fondo resaltando las cápsulas.
 Se necesita cultivo de 24 h de una bacteria capsulada.

 APARATAJE:

-Microscopio.

MATERIALES:

-Asa de siembra desechable.
- Mechero de alcohol.
- Portaobjetos(x 3).
- Pinzas de madera.
- Agua destilada.
- SSF.
- Gradillas.
- Cubeta de tinción.
- Colorantes (fucsina y nigrosina al 1%).

PROCEDIMIENTO:

1.EXTENSIÓN ->  en primer lugar ponemos una gota de SSF en el porta, cogemos colonia de la placa Petri y frotamos en el porta.
2. DESECACIÓN -> con ayuda del mechero de alcohol secamos muy bien la preparación del portaobbjetos.
3. NO FIJACIÓN.
4. TINCIÓN -> 2'' fucsina(tinción células) y lavamos con agua destilada (secar al aire), a continuación colocamos una gota de nigrosina(1%) en un extremo del porta y extendemos por el método de la cuña(con dos portas).

RESULTADO:

- Criptococus.